广誉生物科技有限公司以高素质的科研与服务人员为依托,凭借长期的技术和经验积累,为广大研究者提供快速的,高品质的技术服务。目前,我司提供以下技术服务项目:
3’,5-RACE(rapid amplification of cdna ends)
cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法.
3'-RACE原理
利用mRNA的3' 末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以连有SMART寡核苷酸序列通用接头引物的Oligo(dT)30MN作为锁定引物反转录合成标准第一链cDNA。然后用一个基因特异引物GSP1(gene specific primer,GSP)作为上游引物,用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作为下游引物,以cDNA第一链为模板,进行PCR循环,把目的基因3' 末端的DNA片段扩增出来。
5'-RACE原理
先利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作为一个引物结合位点,以Oligo(dT)30MN作为锁定引物在反转录酶MMLV作用下,反转录合成标准第一链cDNA。利用该反转录酶具有的末端转移酶活性,在反转录达到第一链的5' 末端时自动加上3-5个(dC)残基,退火后(dC)残基与含有SMART寡核苷酸序列Oligo(dG)通用接头引物配对后,转换为以SMART序列为模板继续延伸而连上通用接头(见下图)。然后用一个含有部分接头序列的通用引物UPM(universal primer,UPM)作为上游引物,用一个基因特异引物2(GSP 2 genespecific primer,GSP)作为下游引物,以SMART第一链cDNA为模板,进行PCR循环,把目的基因5'末端的cDNA片段扩增出来。
最终,从2个有相互重叠序列的3'/ 5'-RACE产物中获得全长cDNA,或者通过分析RACE产物的3'和5'端序列,合成相应引物扩增出全长cDNA。
载体构建:
克隆构建是分子生物学研究中最常用的手段之一,也占据了大量的科研时间和精力广誉生物利用研发平台推出分子克隆与载体构建服务,为您的实验省时省力省心。
该服务包括TA克隆载体,真核和原核表达载体构建。
荧光定量PCR
荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号随着PCR反应的积累来实时监控PCR反应的进程,并通过分析软件对PCR的反应进行检测分析的技术。荧光强度达到设定的阈值是,Log浓度与循环数呈线性关系,根据样品扩增达到域值的循环数就可计算出样品中所含的模板量。
我司利用Light Cycler 480平台及配套的分析软件,有资深专业工程师为您提供荧光定量PCR相关的服务以及问题解答。